原代細胞傳代次數—傳代次數是指對一個細胞系進行分批傳代的頻度(通常在一個實驗室范圍內)。某些細胞系相比較其他細胞系而言較不穩定，可能會隨著培養時間的延長而改變，視不同的細胞系和培養條件而定。因此名稱相同的同一細胞系在生理學和形態學(以及轉染能力)性質也可能會有很大的差異。一般而言，細胞在凍存復蘇后的一兩代之內或直到它們*復蘇之前都很難轉染。細胞數量(融合率)——只要培養基質(組織培養皿)尚有空間，細胞就會按指數規律分裂。對于正常細胞而言，細胞生長的速度受細胞密度大小的抑制(接觸抑制)，但癌細胞則不受此限制而會繼續生長并可互相疊加。營養物質的耗竭以及代謝廢物的積聚會影響所有的細胞生長。細胞會因受到營養物質匱乏的壓力而不適于轉染。報告基因的表達率與轉染開始時的細胞數量和細胞健康以及細胞溶解之前的生長情況相關。

培養物污染——培養物可被細菌、酵母、真菌、病毒、支原體、甚至其他細胞種類所污染。各種污染都會導致產生錯誤的結果。支原體污染——支原體污染在所有培養細胞中的比例為5-35%，它可改變細胞生長特性，酶的作用途徑，細胞膜的組成，染色體結構，以及轉染效率。特別是，原代細胞支原體對采用脂質、DEAE-右旋糖酐、磷酸鈣或腺病毒介導的轉染技術有所干擾，其結果致使非典型轉染或轉染效率偏低。這些影響會導致實驗結果的不可靠以及時間和珍貴細胞系的損失。和細菌及真菌不同，支原體污染無法通過視覺檢查發現。它們非常小甚至能夠通過大多數的無菌濾膜;它們還對常用抗生素有抗藥性。所以必需進行支原體污染的常規篩查。
 白介素2IgG    小鼠橫紋肌輔肌動蛋白α (sm Actinin-α)
 白介素2受體γ鏈IgG    小鼠黑色素(MC Ab)
 白介素31受體aIgG    小鼠核因子κB亞基p65親和肽(NF-κB p65)
 白介素32IgG    小鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)
 白介素33IgG    小鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)
 白介素33IgG    小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α) 
 白介素3IgG    小鼠過敏毒素/補體片斷4a(C4a)
 白介素3受體a鏈IgG    小鼠骨粘連蛋白(ON)
 白介素4IgG    小鼠骨形成蛋白6(BMP-6) 
 白介素5IgG    小鼠骨形成蛋白(BMPs) 
原代細胞