ATCC細胞傳代時間一般通過兩個方面進行確定：一是在細胞培養過程中，當培養液由于pH值下降而呈現黃色時，表明細胞已經達到Z大密度，需要換液或進行傳代培養；二是觀察細胞形態，健康細胞形態飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。初代培養的傳代很重要，是建立細胞系的關鍵時期。在傳代時一般要特別注意以下3點：

①ATCC細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養時細胞多為混雜生長，上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存的情況很常見。傳代時不同的細胞有不同的消化時間，因此要根據需要，注意觀察及時進行處理，并可根據不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間不同而分離和純化所需要的細胞。另外早期傳代的培養細胞較已經建系的培養消化時間相對較長。吹打細胞時動作要輕巧，盡可能減少對細胞的損傷。

③傳代時細胞接種數量要多一些，使ATCC細胞能盡快適應新環境有利于細胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳人新的培養瓶。