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HPLC的日常操作條件

來源:天津艾維歐科技發展有限公司   2007年12月27日 15:10  

液相色譜的日常維護
HPLC的日常操作條件:溫度:10~30℃;相對濕度小于80%; 是恒溫、恒濕,遠離高電磁干擾、高振動設備,有良好的通風設施。 HPLC的環境設置: HPLC用水可以通過以下幾個方面來得到: 1 專門的純水機或超純水機;

2 去離子水重蒸;

3 二次或三次重蒸水;

4 采用類似家用的純水機;

5 市場上瓶裝的純凈水或蒸餾水;

6 其它途徑;

    不管采用何種途徑,配制流動相應用新鮮水,水質越高放置時間越短。理想的HPLC用水應為18.2Ω的超純水,并通過0.22um的濾膜,除去熱源、有機物、無機離子及空氣等。 HPLC六通閥進樣器的使用及保養 六通閥進樣器是液相色譜系統中的進樣器,它是由圓形密封墊(轉子)和固定底座(定子)組成。美國Rheodyne公司的六通閥進樣器zui為通用,各大HPLC儀器制造商均以此產品作為儀器的進樣器。 工作原理:手柄位進樣(Load)位置時,樣品經微量進樣針從進樣孔注射進定量環,定量環充滿后,多余樣品從放空孔排出;將手柄轉動至進樣(Inject)位置時,閥與液相流路接通,由泵輸送的流動相沖洗定量環,推動樣品進入液相分析柱進行分析。 雖然六通閥進樣器具有結構簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點,但正確的使用和維護將能增加使用壽命,保護周邊設備,同時增加分析準確度。如使用得當的話,六通閥進樣器一般可連續進樣3萬次而無需維修。手柄處于Load和Inject之間時,由于暫時堵住了流路,流路中壓力驟增,再轉到進樣位,過高的壓力在柱頭上引起損壞,所以應盡快轉動閥,不能停留在中途。在HPLC系統中使用的注射器針頭有別于氣相色譜,是平頭注射器。一方面,針頭外側緊貼進樣器密封管內側,密封性能好,不漏液,不引入空氣;另一方面,也防止了針頭刺壞密封組件及定子。 六通閥進樣器的進樣方式有部分裝液法和*裝液法兩種。使用部分裝液法進樣時,進樣量zui多為定量環體積的75%,如20μl的定量環zui多進樣15μl的樣品,并且要求每次進樣體積準確、相同;使用*裝液法進樣時,進樣量zui少為定量環體積的3至5倍,即20μl的定量環zui少進樣60至100μl的樣品,這樣才能*置換樣品定量環內殘留的溶液,達到所要求的精密度及重現性。推薦采用100ul的平頭進樣針配合20ul滿環進樣。 可根據進樣體積的需要自已制作定量環,一般不要求計算定量環的體積,譬如,一根名義上10μl的定量環,實際是9μl還是1lμl并不重要,因為被測樣品和校正樣品的進樣體積保持一致,在計算結果時誤差都被抵消了。
    進樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進樣閥的物質,樣品溶液均要用0.45μm的濾膜過濾。防止微粒阻塞進樣閥和減少對進樣閥的磨損。為防止緩沖鹽和其它殘留物質留在進樣系統中,每次結束后應沖洗進樣器,通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動相沖洗,在進樣閥的Load和Inject位置反復沖洗,再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側。

泵的保養:

使用流動相盡量要清潔;

進液處的砂芯過濾頭要經常清洗;

流動相交換時要防止沉淀;

避免泵內堵塞或有氣泡;

每次分析結束后,要反復沖洗進樣口,防止樣品的交叉污染;

柱的保養:

柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動;

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