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氣單胞菌通用PCR試劑盒的PCR反應條件設置:
a)預變性:95℃,5 min可以讓白細胞裂解,釋放可用于PCR擴增的基因組DNA。請勿縮短時間或降低溫度。
b)退火溫度:退火溫度設置為引物Tm值即可。然而,使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增,并提高全血模板的擴增效率。因此,如擴增產物特異性較差,可以建立一個溫度梯度反應去尋找引物模板適退火溫度。
c)延伸時間:按30 sec/kb設定,如不足30 sec,設置30 sec即可。
d)擴增循環數:35個循環已可以擴增足量產物。太多的循環將會導致非特異性擴增增加。
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