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細(xì)菌的培養(yǎng)方法

時間:2022/9/13閱讀:1713
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   根據(jù)不同的標(biāo)本及不同的培養(yǎng)目的,可選用不同的培養(yǎng)方法。通常把細(xì)菌的培養(yǎng)方法分為需氧培養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)、微需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)四種。

1.需氧培養(yǎng)

是指需氧菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養(yǎng),將已接種好的平板、斜面、液體培養(yǎng)基等在空氣中置35℃孵育箱內(nèi)孵育18~24h,無特殊要求的細(xì)菌均可生長。少數(shù)生長緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)3-7d甚至1個月才能生長。為使孵育箱內(nèi)保持一定的濕度,可在其內(nèi)放置一杯水。對培養(yǎng)時間較長的培養(yǎng)基,接種后應(yīng)將試管口塞好棉塞或硅膠塞后用石蠟-凡士林封固,以防培養(yǎng)基干裂。

2.二氧化碳培養(yǎng)

某些細(xì)菌,在初次分離時,須在5%~10%二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)才能生長。常用的培養(yǎng)法如下。

①二氧化碳培養(yǎng)箱法:二氧化碳孵箱能自動調(diào)節(jié)二氧化碳的含量、溫度和濕度,培養(yǎng)物置于孵育箱內(nèi)閣,孵育一定時間后可直接觀察生長結(jié)果。

②燭缸培養(yǎng)法:取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器,將接種好的培養(yǎng)基放入缸內(nèi),點燃蠟燭后放在缸內(nèi)稍高于培養(yǎng)物的位置上,缸蓋或缸口均涂以凡士林,加蓋密閉。因缸內(nèi)蠟燭燃燒氧逐漸減少,數(shù)分鐘后蠟燭自行熄滅,此時容器內(nèi)二氧化碳含量約占5%~10%。將缸置于35℃普通孵育箱內(nèi)孵育。

③氣袋法:選用無毒透明的塑料袋,將已接種標(biāo)本的培養(yǎng)皿放入袋內(nèi),盡量祛除袋內(nèi)空氣后將開口處折疊并用彈簧夾夾緊袋口。使袋呈密閉狀態(tài),執(zhí)斷袋內(nèi)已置的二氧化碳產(chǎn)氣管(安瓿)產(chǎn)生二氧化碳,數(shù)分鐘內(nèi)就可達(dá)到需要的二氧化碳培養(yǎng)環(huán)境,置于35℃孵育箱內(nèi)孵育。

④化學(xué)法:常用NaHCO3-鹽酸法。按每升容積稱取NaHCO30.4g與濃鹽酸0.35ml比例,分別置容器內(nèi),連同容器置于玻璃缸內(nèi),蓋緊密封,傾斜缸位使鹽酸與NaHCO3接觸而生成二氧化碳。于35℃孵育箱內(nèi)孵育。

3.微需氧培養(yǎng)

微需氧菌培養(yǎng)在大氣中及絕對無氧環(huán)境中均不能生長,在含有5%-6% 氧氣,5%-10%二氧化碳和85%氮氣的氣體環(huán)境中才可生長,將標(biāo)本接種到培養(yǎng)基上,置于上述氣體環(huán)境中,35℃進(jìn)行培養(yǎng)即微需氧培養(yǎng)法。

4.厭氧培養(yǎng)

厭氧菌對氧敏感,培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢的厭氧環(huán)境。厭氧培養(yǎng)常用的方法有:物理法、化學(xué)法、生物法。如厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法、需氧菌共生厭氧法等。


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