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進口elisa試劑盒實驗的操作要點

時間:2017/11/17閱讀:197
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進口elisa試劑盒實驗的操作要點
1、標本的采取和保存
可用作ELISA測定的標本十分廣泛,體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定(如血清、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物)。大部分ELISA檢測均以血清為標本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA中血漿和血清可同等應用。血清標本可按常規(guī)方法采集,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì),以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久,其中的可發(fā)生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾,澄清后再檢測。反復凍融會使抗體效價跌落,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存。保存血清自采集時就應注意無菌操作,也可加入適當防腐劑。
2、豬ELISA試劑盒試劑的準備
按Elisa試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應用pH計測量較正。從冰箱中取出的試驗用試劑應待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。
 3、加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡。 加標本一般用微量加樣器,按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定(如間接法ELISA)需用稀釋的血清,可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液,再在其中加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。
 4、保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加標本和加酶結合物后。抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當。
ELISA屬固相免疫測定,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的機會,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴散才能達到反應的終點。在其后加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達。為加速反應,可提高反應的溫度,有些試驗在43℃進行,但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應4℃更為*,在放射免疫測定中多使反應在冰箱中,以形成zui多的沉淀。但因所需時間太長,在ELISA中一般不予采用。
進口elisa試劑盒前腦啡肽(PENK)ELISA試劑盒    ,英文名:    PENK ELISA Kit
前列腺轉谷氨酰胺酶(TGM4)ELISA試劑盒    ,英文名:    TGM4 ELISA Kit
前列腺抑制肽(PIP)ELISA試劑盒    ,英文名:    PIP ELISA Kit
前列腺酸性磷酸酶(ACP3)ELISA試劑盒    ,英文名:    ACP3 ELISA Kit
前列腺素還原酶2(PTGR2)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGR2 ELISA Kit
前列腺素還原酶1(PTGR1)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGR1 ELISA Kit
前列腺素I合酶(PTGIS)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGIS ELISA Kit
前列腺素F受體(FP)ELISA試劑盒    ,英文名:    FP ELISA Kit
前列腺素E受體3(EP3)ELISA試劑盒    ,英文名:    EP3 ELISA Kit
前列腺素E受體2(EP2)ELISA試劑盒    ,英文名:    EP2 ELISA Kit
前列腺素E合酶2(PTGES2)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGES2 ELISA Kit
前列腺素E合酶(PTGES)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGES ELISA Kit
前列腺素D合酶(PTGDS)ELISA試劑盒    ,英文名:    PTGDS ELISA Kit
前列腺素D2合成酶(PGD2S)ELISA試劑盒    ,英文名:    PGD2S ELISA Kit
前列腺六跨膜表皮抗原2(STEAP2)ELISA試劑盒    ,英文名:    STEAP2 ELISA Kit
前列腺干細胞抗原(PSCA)ELISA試劑盒    ,英文名:    PSCA ELISA Kit
前列腺凋亡應答因子4(PAR4)ELISA試劑盒    ,英文名:    PAR4 ELISA Kit
前列腺蛋白類脂肪酶B(LIPB)ELISA試劑盒    ,英文名:    LIPB ELISA Kit
前膠原賴氨酸-2-酮戊二酸-5-雙加氧酶1(PLOD3)ELISA試劑盒    ,英文名:    PLOD3 ELISA Kit
前膠原C端蛋白酶增強子1(PCPE1)ELISA試劑盒    ,英文名:    PCPE1 ELISA Kit進口elisa試劑盒

 

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